补肾健脾解毒方对慢性HBV携带者免疫耐受的影响研究

【摘要】研究目的：通过本研究,评价补肾健脾解毒方对慢性HBV携带者的血清HBVDNA定量与血清HBsAg、HBeAg定量及肝功能指标的影响,从而验证其临床疗效。通过观察补肾健脾解毒方干预对慢性HBV携带者CD4+CD25+Treg表达频率及功能,DC成熟缺陷、数量及免疫功能指标,以及细胞免疫功能指标的影响,探求其打破免疫耐受、增强细胞免疫功能的机制。以期为临床治疗慢性乙肝病毒携带者提供有效的中药复方,进而为中医药治疗慢性HBV携带者提供思路和理论依据。研究方法：采用安慰剂对照的研究方法,分为2个试验组。治疗组纳入30例符合诊断标准的慢性HBV携带者,采用补肾健脾解毒方干预；对照组纳入10例健康志愿者,采用安慰剂干预,48周后评价疗效。观察补肾健脾解毒方对慢性HBV携带者(1)血清HBVDNA定量、血清乙肝标志物HBsAg、HbeAg定量的变化及阴转情况的影响；(2)CD4+CD25+Treg表达频率及功能(IL-10、TGF-β)的影响；(3)DC成熟缺陷(形态、表型分析)、数量及免疫功能指标(MLR、IL-12、IFN-γ)的影响；(4)细胞免疫功能指标(CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+)的影响。并观察不良反应的发生。研究结果：1补肾健脾解毒方治疗慢性HBV携带者的临床疗效补肾健脾解毒方治疗慢性HBV携带者48周,血清HBVDNA水平从8.2701gIU/ml下降至7.1681gIU/ml,平均下降幅度达到1.1021gIU/ml,差异有统计学意义(P<0.05)；其中下降较基线水平>11gIU/ml、>21gIU/ml,>31gIU/ml的例数(百分数)分别为：14(50.00%)、6(17.86%)、2(7.14%),无阴转病例；干预结束后血清HBVDNA载量<105IU/ml有3例,占总数比例为3/28(10.71%)。此3例基线血清HBVDNA载量分别为8.25×106IU/ml、2.93×107IU/ml、6.74×105IU/ml；对应的干预结束时的血清HBVDNA载量分别为2.69×103IU/ml、5.41×103IU/ml、1.82×104IU/ml;对应的下降幅度分别是3.4871gIU/ml、3.7341gIU/ml、1.5691gIU/ml,下降幅度较大。补肾健脾解毒方治疗慢性HBV携带者48周,血清HBsAg定量均值从4.6181gIU/ml下降至3.9931gIU/ml,平均下降0.6251gIU/ml,差异有统计学意义(P<0.05)；其中下降较基线水平>0.51gIU/ml、>11gIU/ml、>21gIU/ml的例数(百分数)分别为：9(32.14%)、5(17.86%)、1(3.57%),无阴转病例出现。而血清HBeAg均值从基线的1108.52S/Co下降至774.07S/Co,平均下降幅度达到334.45S/Co,差异有统计学意义(P<0.05)；无1例出现血清HBeAg阴转。补肾健脾解毒方治疗慢性HBV携带者48周,血清ALT、AST、γ-GT水平均值分别从基线的33.8IU/L、26.3IU/L、31.7IU/L下降为27.4IU/L、18.7IU/L、25.1IU/L。2补肾健脾解毒方对慢性HBV携带者的免疫调节作用机制慢性HBV携带免疫耐受者的外周血CD4+CD25+Treg表达频率为7.68%,明显高于健康人的5.72%(P<0.05)；血清IL-10和TGF-β含量均明显高于健康人(P<0.05)。经补肾健脾解毒方干预48周,慢性HBV携带者的CD4+CD25+Treg表达频率、血清IL-10和TGF-β含量均出现明显下降(P<0.05),接近健康人对照组水平(均有P>0.05)。慢性HBV携带免疫耐受者的DC成熟表面标记物HLA-DR、CD86、CD80和CD1α的表达水平分别为61.34%、55.78%、42.63%、43.17%,与DC诱导MLR的能力、MLR上清液中IL-12和IFN-γ的表达水平全都明显低于健康人(均有P<0.05)。补肾健脾解毒方干预48周,MLR上清液中IL-12和IFN-γ的表达水平明显上升,对DC诱导MLR能力也有显著提升(均有P<0.05)；但48周后治疗组的HLA-DR、CD86、CD80和CD1α的表达水平,以及MLR上清液中IFN-γ的表达水平,DC诱导MLR的能力仍显著低于对照组(均有P<0.05),而IL-12则接近健康人对照组水平(P>0.05)。而反映细胞免疫功能的指标方面,慢性HBV携带者的外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞表达水平分别为62.94%、32.68%,明显低于健康人对照组的72.28%、39.49%；而CD8+T淋巴细胞的表达水平为29.03%,则明显高于健康人对照组的23.04%；CD4+/CD8+比值方面,慢性HBV携带者为1.18,显著低于健康人对照组的1.77(以上均有P<0.05)。补肾健脾解毒方干预48周后,慢性HBV携带者治疗组的CD3+、CD4+T淋巴细胞的表达水平分别上升至67.35%、37.22%,而CD8+T淋巴细胞的表达水平则下调至24.41%,CD4+/CD8+比值明显上升至1.61(均有P<0.05)。但48周时两组比较,慢性HBV携带者的CD3+T淋巴细胞的表达水平仍低于对照组(均有P<0.05),而CD4+、CD8+T淋巴细胞的表达水平以及CD4+/CD8比值则与对照组无显著差异(均有P>0.05)。研究结论：补肾健脾解毒方对慢性HBV携带者的HBVDNA复制、血清乙肝病毒标志物(HBsAg、HBeAg)的表达有一定的抑制作用,并有一定的保肝作用,进而可能减少免疫耐受状态下高HBV负荷所带来疾病进展的风险。补肾健脾解毒方对慢性HBV携带者的抗HBV作用主要是通过下调CD4+CD25+Treg的表达,促进DC成熟,增强细胞免疫功能,进而抑制／清除HBV而实现的：(1)通过减少血清IL-10、TGF-β分泌来降低对CD4+CD25+Treg的刺激,下调CD4+CD25+Treg的表达,减轻CD4+CD25+Treg主导的免疫抑制作用,激起HBV特异性免疫应答,进而抑制／清除HBV；(2)通过促进DC成熟,增强DC诱导MLR能力,从而增强DC的抗原递呈能力,调节Th1/Th2免疫反应,诱导T细胞产生有效的免疫应答,进而抑制／清除HBV;(3)DC的成熟,使iDC诱导产生的CD4+CD25+Treg表达减少,而Treg的表达减少使DC与非调节性T细胞的结合并抑制DC的活化、成熟和刺激T细胞增殖的能力上升,使CD3+、CD4+T淋巴细胞表达水平提升,CD8+T淋巴细胞的表达水平下降,CD4+/CD8+比值趋于正常,诱导病毒特异性CTL能力增强,进而抑制／清除HBV。
【作者】陈英杰；
【导师】周大桥；
【作者基本信息】广州中医药大学，中医内科学（专业学位），2014，博士
【关键词】慢性乙型肝炎；病毒携带者；补肾健脾解毒方；调节性T细胞；树突状细胞；

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